Ventajas de la columna de Shodex HILIC NH2P, de base polimérica contra las columnas HILIC de sílice

– Kanna Ito, Shodex/Showa Denko America Inc.

Introducción:

Hidrofilic Interaction Chromatography, HILIC (Interacción hidrofilica), ha sido un método de separación muy usual para el análisis de carbohidratos por HPLC. Hay una amplia variedad de fases estacionarios de HILIC. La base del material puede ser de sílice o polimérica modificada con varios funcionales polares como amidas, aminos, diol and ciano. La columna Shodex Asahipak NH2P series es empacada con gel de polivinil alcohol, que es modificada con poliamina. En este artículo, se compara la función de las columnas HILIC NH2P y las columnas de amino HILIC de base de sílice.

 

Condiciones de experimento:

La columna NH2P-50 4E y la de amino en base sílice (por otra compañía), fue comparada en base a al trabajo de su función analítica. La fase móvil consistió de una mezcla de acetonitrilo y agua. Un sistema de HPLC convencional fue usado con un detector Shodex RI (índice de refracción).

 

Resultados

Cuando la concentración de acetonitrilo ( ACN) fue incrementada, la columna NH2P-50 4E mostro una fuerte retención y un alto número de plato teóricos por todos los sacararidos y alcoholes de azúcar analizados con esta columna. Mientras que las columnas de base sílice mostraron inconsistentes cambios de sensibilidad y bajos platos teóricos con el análisis de varios sacáridos.

Con las columnas de amino en base de sílice se mostró que la medida de galactosa mostro una baja sensibilidad ( Figura 1).

Figura 1. Análisis de sacáridos con la columna de Shodex NH2P-50 4E comparada con una columna de amino de base de sílice. Dimensiones Shodex NH2P-50 4 E: 4,6 x 250 mm, fluente: CH3CN/H2O=75/25, velocidad de flujo 1.0 mL/min, Temperatura 25 oC, Detector; Shodex™ RI.

 

A parte de las separaciones de sacáridos, las columnas NH2P son adecuadas para el análisis de los alcoholes de azucares y las separaciones de sacáridos. La separación de algunos azucares de alcohol y pares de sacáridos (por ejemplo, el sorbitol y la glucosa) su separación es difícil por medio de una columna HILIC de base de sílice, mientras que con la columna NH2P de Shodex, provee una base de separación óptima de estos azucares mencionados.

Otra ventaja de las columnas de base polimérica NH2P, es la estabilidad química, que resuelve el problema de la deterioridad con el tiempo que con las columnas de base de sílice no es posible. Una prueba de que la columna NH2P es de alta tolerancia química es que trabaja a una capacidad de ph ( 2-13). Esto permite el uso de varios solventes, que incluyen solventes de limpieza (cleaning solvents).Este análisis bajo extremas condiciones (sobre 60 hrs, 0.1 (mol/L) de NH2SO4 y sobre 160 hrs de NaOH 0.005 mol/L a un ph 11.4) no mostraron ningún deterioro de la columna. Como también es recomendable para la separación de derivativos de piridilamino que usan métodos que requieren condiciones alcalinas.

 

Además, se ha reportado que existe un pequeño”bleeding” de partículas con estas columnas NH2P, consecuentemente, esto reduce el nivel de ruido “background noise”. Esto es beneficial cuando es “cloupling “instalada en el sistema de HPLC con el detector CCA (corona cargada en aerosol) o llamada “evaporative light scattering detector”.

 

Conclusiones:

Las ventajas de las columnas de amino en base polimérica Shodex NH2P, comparadas con las convencionales de base de sílice en el mercado:

  • No hay ninguna adsorción de partículas de sacáridos o alcoholes de azúcar.
  • Tolerancia en la variedad de condiciones analíticas ej. : en fases móviles, solventes etc.
  • Hay un pequeño “bleeding”. Usando estas ventajas existe una variedad de aplicaciones con la columna de Shodex NH2P, que incluye para el análisis de carbohidratos en alimentos, y en otras áreas de biomedicina como el análisis de glicoproteínas y glicolipidos.

 

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